实时荧光定量，普通RTPCR与实时荧光定量PCR的引物有什么区别

来源：整理时间：2025-03-20 20:35:45 编辑：智能门户手机版

本文目录一览

1，普通RTPCR与实时荧光定量PCR的引物有什么区别
2，实时荧光定量PCR和定量PCR有什么区别
3，实时荧光定量PCR技术原理是什么
4，什么是实时荧光定量PCR有什么作用请用自己的话详细说明搜
5，realtime RTPCR是什么意思
6，什么是实时荧光定量PCR有什么应用领域与传统PCR有什么区别

1，普通RTPCR与实时荧光定量PCR的引物有什么区别

实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间.同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了

普通RTPCR与实时荧光定量PCR的引物有什么区别

2，实时荧光定量PCR和定量PCR有什么区别

实时荧光定量PCR和定量PCR有什么区别实时荧光是反应荧光数值定量，普通那种是通过条带半定量，现在做半定量的已经很少了，除非是一些验证试验必须要图的

完全两个不同的概念，梯度pcr是指你的pcr仪在设置的时候可以同一时间不同位置设置一个从高到低的温度梯度，以便在不知道退火温度的情况下选择一个最适宜的退火温度。二实时荧光定量pcr是通过再pcr过程中掺入荧光染料或释放荧光基团，从而对模板进行相对定量或绝对定量的实验，在实时荧光定量pcr时也可以设置梯度，总的来说实时荧光定量pcr是一种实验方法，而梯度pcr是一种实验手段

实时荧光定量PCR和定量PCR有什么区别

3，实时荧光定量PCR技术原理是什么

聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 PCR 技术应运而生。所谓的实时荧光定量 PCR 就是通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。生物帮上面有相关知识， http://www.bio1000.com/zt/cell/201378.html 动物细胞培养, 植物细胞培养, ES细胞（胚胎干细胞）培养, 细胞悬浮培养, 贴壁细胞培养。

实时荧光定量PCR技术原理是什么

4，什么是实时荧光定量PCR有什么作用请用自己的话详细说明搜

荧光定量PCR是将荧光素结合到PCR的反应物上,然后随着反应的进行检测荧光的强度可以实时的检测产物的量.

pcr的全称是：多聚酶链反应，用俗话说就是人为地制造一个环境，使双链基因片段进行复制、扩增目的基因：就是你想要扩增的基因片段变性：是在热的环境下使双链解链，一般需要94摄氏度引物：引导复制的开始，是一种rna单链片段，能引导复制的起始位置聚合酶：用的是taq酶是在火山口找到的一种耐热的酶，在它的作用下以四种脱氧核苷酸（dntp）为原料合成双链延伸：通俗点说就是原来的模板链和新合成的单链组成一条新的双链的过程，延伸时间的长短、温度的高低会影响新双链的质量 pcr的大致过程 1、模板dna 2、（第一轮循环）：模板dna变性和引物复性 3、（第一轮循环）：引物延伸 4、（第二轮循环）：新合成的双链变性和引物复性 5、（第二轮循环）：引物延伸 …… 如此往复，直至结束之后可以泡个琼脂糖电泳看看扩增的情况，也可以测od值，计算浓度现在也有real time pcr，实时定量pcr，可以在间隔相等的时间测反应物的浓度，获得相对较准确的数据，比较简便。总的来说，做分子生物学实验就是一项烧钱的活

5，realtime RTPCR是什么意思

real-time RT-PCR实时荧光定量RT-PCR双语对照词典结果：网络释义1. 荧光定量RT-PCR2. 实时定量RT-PCR3. 荧光RT-PCR

外文名【Real-time Quantitative polymerase chain reaction】中文名【实时荧光定量多聚核苷酸链式反应】中文简称【实时荧光定量PCR】外文简称【RT PCR】【实时荧光定量PCR技术】，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。·Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。【技术原理】将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

6，什么是实时荧光定量PCR有什么应用领域与传统PCR有什么区别

．荧光共振能量传递 (FRET)某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。2．荧光化学：荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。二．实时荧光PCR技术靶基因的确定及引物和探针的设计原则1．靶基因的确定：选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性(漏检)。2．检测片段的确定：选择检测组内的保守 (突变少)（避免假阴性）、组间特异的序列 (突变多)（避免假阳性）作为引物探针的设计位置。片段长度70-150bp。3．引物：长度17-25bp;GC含量30-80%;退火温度(Tm值)58-60℃；避免稳定的引物二聚体（特别是多联检测）及发夹结构(自由能大于-3.5kc/m)；序列不能出现连续的G，3端避免G或C，最后5个碱基内避免两个以上的G或C。4．探针：长度20-30bp（Taqman)或16-25bp(MGB)；GC含量30-80%；Tm值为68-70℃；避免稳定的二聚体及发夹结构 (自由能大于-3.5kc/m)；5端不能是G；位置尽量靠近上游引物；选择波长差异较大（多联检测）或Fam(单联检测）的荧光标记。三.特点和优势1．特异性强：引物和探针的“双保险”，避免检测的假阳性。2．灵敏度高：分析PCR产物的对数期，自动化仪器收集荧光信号，避免了许多人为因素干扰。3．避免污染：全封闭反应，无须PCR后处理。4．实现定量：运用标准品获得标准曲线，结合Ct值进行准确定量。5．高效低耗：可实现一管多检。6．操作简便：在线式实时监测扩增结果，不必接触有害物质。7．快速：反应时间<1.5小时。四．实用意义：1．提高检测效率，缩短检测周期，提高通关速度；2．降低检测成本，提高经济与社会效益。