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共焦显微镜,共聚焦显微镜的基本原理

来源:整理 时间:2025-02-14 11:46:22 编辑:智能门户 手机版

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1,共聚焦显微镜的基本原理

传统的光学显微镜使用的是场光源,标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰;激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描,标本上的被照射点,在探测针孔处成像,由探测针孔后的光电倍增管(PMT)或冷电耦器件(cCCD)逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图像模糊的缺点。

共聚焦显微镜的基本原理

2,与单光子共焦显微镜相比双光子共焦显微镜有何优点

双光子共焦显微镜具有许多突出的优点:1. 双光子共焦显微镜可以采用波长比较长的、在生物组织中穿透能力比较强的红外激光作为激发光源,因此可以解决生物组织中深层物质的层析成像问题。2. 由于双光子荧光波长距离发光波长,因此双光子共焦显微镜可以实现暗场成像。3. 双光子可以避免普通成像中的荧光漂白问题和生物细胞的光致毒问题 。4. 双光子跃迁具有很强的激发选择性,有利于对生物组织中一些特殊物质进行成像研究。
首先光源不同,一个是激光,一个是紫外或其他光照射产生的荧光。两外,观察方式不同,激光共聚焦是激光投射扫描;荧光是受激发产生的,光源可以在载物台上方,也可以在载物台下方。最后,制片方式也不同,激光共聚焦制片简单;荧光制片麻烦。----午禾科技

与单光子共焦显微镜相比双光子共焦显微镜有何优点

3,激光扫描共焦显微镜定义

工作原理 激光扫描显微镜是建立在光学显微镜及各种扫描显微镜基础上的一种新型的扫描成象系统。利用聚焦的激光束在样品表面扫描,同时利用光电检测器件接收样品反射光(或透射光),样品结构的变化使反射光(或透射光)强度改变,因而使光电检测器的输出电流改变,经信号处理,同步显示在计算机屏幕上。由于照射在样品的是聚焦的激光束,具有很小的直径,因此没有来自邻近区域的散射光的影响,从而可以提高信噪比,即增强了对比度。同时由于激光扫描显微镜是直接接收反射光(或透射光),因此检测灵敏度高,且检测系统比较简单。 本仪器采用共焦方法,还可以在光束能透入的范围内实现深度剖面的分层成象,因此成为研究薄膜材料、集成电路及生物组织乃至细胞等的微细结构及其深度剖面的非常有效的工具。对半导体器件,由于光电效应,可通过适当负载直接接收光电流,将光电信号通过成象处理,即可得到光电成象。

激光扫描共焦显微镜定义

4,激光扫描共聚焦显微镜的激光共聚焦显微镜原理

在普通宽视野光学显微镜中,整个标本全部都被水银弧光灯或氙灯的光线照明,图像可以用肉眼直接观察 。 同时,来自焦点以外的其他区域的荧光对结构的干扰较大,尤其是标本的厚度在 2um 以上时,其影响更为明显。激光共聚焦显微镜脱离了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式,采用激光束作光源,激光束经照明针孔,经由分光镜反射至物镜,并聚焦于样品上,对标本焦平面上每一点进行扫描。 组织样品中如果有可被激发的荧光物质,受到激发后发出的荧光经原来入射光路直接反向回到分光镜,通过探测针孔时先聚焦,聚焦后的光被光电倍增管(PMT)探测收集,并将信号输送到计算机,处理后在计算机显示器上显示图像 。 在这个光路中,只有在焦平面的光才能穿过探测针孔,焦平面以外区域射来的光线在探测小孔平面是离焦的,不能通过小孔。因此,非观察点的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。由于照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔与探测针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,即共聚焦[7]。 以激光作光源并对样品进行扫描,在此过程中两次聚焦,故称为激光扫描共聚焦显微镜。

5,共焦激光扫描显微镜

1.工作原理 激光扫描显微镜是建立在光学显微镜及各种扫描显微镜基础上的一种新型的扫描成象系统。利用聚焦的激光束在样品表面扫描,同时利用光电检测器件接收样品反射光(或透射光),样品结构的变化使反射光(或透射光)强度改变,因而使光电检测器的输出电流改变,经信号处理,同步显示在计算机屏幕上。由于照射在样品的是聚焦的激光束,具有很小的直径,因此没有来自邻近区域的散射光的影响,从而可以提高信噪比,即增强了对比度。同时由于激光扫描显微镜是直接接收反射光(或透射光),因此检测灵敏度高,且检测系统比较简单。 本仪器采用共焦方法,还可以在光束能透入的范围内实现深度剖面的分层成象,因此成为研究薄膜材料、集成电路及生物组织乃至细胞等的微细结构及其深度剖面的非常有效的工具。对半导体器件,由于光电效应,可通过适当负载直接接收光电流,将光电信号通过成象处理,即可得到光电成象。
国家生物医学分析中心电镜实验室有:激光扫描共聚焦显微镜 bio-rad radiance2100、 <a href="http://wenwen.soso.com/z/urlalertpage.e?sp=shttp%3a%2f%2fwww.ncba.cn%2fdj%2fdj_ins.asp" target="_blank">http://www.ncba.cn/dj/dj_ins.asp</a>设备主要指标: <a href="http://wenwen.soso.com/z/urlalertpage.e?sp=shttp%3a%2f%2fwww.ncba.cn%2fdj%2fconf.asp" target="_blank">http://www.ncba.cn/dj/conf.asp</a>

6,共聚焦显微镜 微分干涉显微镜 哪个更好

没什么好不好的,各有各的特点,看你具体实验的要求微分干涉显微镜可以看活细胞共聚焦显微镜可以做荧光这是主要的区别
1952年,nomarski在相差显微镜原理的基础上发明了微分干涉差显微镜(differential interference contrast microscope)。dic显微镜又称nomarski相差显微镜(nomarki contrast microscope),其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比,其标本可略厚一点,折射率差别更大,故影像的立体感更强。 dic显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜,技术设计要复杂得多。dic利用的是偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器(polarizer)、dic棱镜、dic滑行器和检偏器(analyzer)。偏振器直接装在聚光系统的前面,使光线发生线性偏振。在聚光器中则安装了石英wollaston棱镜,即dic棱镜,此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致,在穿过标本相邻的区域后,由于标本的厚度和折射率不同,引起了两束光发生了光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个wollaston棱镜,即dic滑行器,它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置,即检偏器。在光束形成目镜dic影像之前,检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光,从而使二者发生干涉。x和y波的光程差决定着透光的多少。光程差值为0时,没有光穿过检偏器;光程差值等于波长一半时,穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上,标本结构呈现出亮暗差。为了使影像的反差达到最佳状态,可通过调节dic滑行器的纵行微调来改变光程差,光程差可改变影像的亮度。调节dic滑行器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象,通常是一侧亮,而另一侧暗,这便造成了标本的人为三维立体感,类似大理石上的浮雕。 dic显微镜使细胞的结构,特别是一些较大的细胞器,如核、线粒体等,立体感特别强,适合于显微操作。目前像基因注入、核移植、转基因等的显微操作常在这种显微镜下进行。differential interference contrast microscopy (dic), also known as nomarski interference contrast (nic) or nomarski microscopy, is an optical microscopy illumination technique used to enhance the contrast in unstained, transparent samples. dic works on the principle of interferometry to gain information about the optical density of the sample, to see otherwise invisible features. a relatively complex lighting scheme produces an image with the object appearing black to white on a grey background. this image is similar to that obtained by phase contrast microscopy but without the bright diffraction halo.dic works by separating a polarised light source into two beams which take slightly different paths through the sample. where the length of each optical path (i.e. the product of refractive index and geometric path length) differs, the beams interfere when they are recombined. this gives the appearance of a three-dimensional physical relief corresponding to the variation of optical density of the sample, emphasising lines and edges though not providing a topographically accurate image.
这个不是哪个好或不好的问题,要根据你的实验要求来定,共聚焦基本上都是进口的,微分干涉显微镜国内也在做,而且也可以标到100倍物镜,有需要的话可以和上海测维光电技术有限公司联系!
文章TAG:焦显显微镜共聚共聚焦显微镜共焦显微镜

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